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發(fā)布時(shí)間:2021-02-01

 

硫乙醇酸鹽流體培養基(Fluid Thioglycollate Medium)是 Brewer 1940 年發(fā)明,自20 世紀50 年代起,國內外藥典陸續將其收錄,用于藥品的無(wú)菌檢查。1977 年版《中國藥典》無(wú)菌檢查項下,將硫乙醇酸鹽流體培養基作為選擇性培養基列入,并注明用于汞砷類(lèi)化合物的無(wú)菌檢查。1985 年版《中國藥典》,硫乙醇酸鹽流體培養基收載于無(wú)菌檢查項下,培養基的名稱(chēng)為“需氧、厭氣菌培養基”。在此后的各版《中國藥典》及《中國生物制品規程》,均收載硫乙醇酸鹽流體培養基用于無(wú)菌檢查。

雖然硫乙醇酸鹽流體培養基存在一定的局限性,其不能使所有的梭狀芽孢桿菌生長(cháng),但之所以能夠沿用至今,是因為其具有不可替代的巨大優(yōu)勢。即其能在普通有氧環(huán)境下提供厭氧條件,使需氧菌和厭氧菌均能夠生長(cháng)良好,并易于觀(guān)察結果,這提供了一般實(shí)驗室難以達到的厭氧培養條件。
 

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成分分析及原理
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我們先看一下硫乙醇酸鹽流體培養基的配方:

(1)碳源和氮源

酪胨(胰酶水解))L-胱氨酸:是由酪蛋白經(jīng)過(guò)胰酶水解后,將大分子的酪蛋白分解為?、胨、肽及多種氨基酸。由于原材料是從奶中提取的酪蛋白,質(zhì)量穩定,氨基酸種類(lèi)多,優(yōu)于一般的胨,與L-胱氨酸構成細菌成長(cháng)所需的氮源。

葡萄糖 : 提供微生物生長(cháng)所需的碳源。自然界中大多數微生物都能利用葡萄糖,由于細菌代謝過(guò)程中分解代謝葡萄糖產(chǎn)酸,培養及加熱滅菌時(shí)葡萄糖被破壞會(huì )產(chǎn)生有毒物質(zhì),因此應注意其用量及加熱次數。

酵母浸出粉 : 酵母浸出粉是由氨基酸類(lèi)、肽類(lèi)、水溶性維生素及酵母多糖、酵母核酸組成的一種混合物。它不僅能補充氮源,還能提供微生物生長(cháng)的各種維生素及氨基酸。

2)無(wú)機鹽類(lèi)

氯化鈉及酪胨、酵母浸出粉中含有的等無(wú)機離子,構成細菌細胞的組織物質(zhì),具有影響酶活性及調節滲透壓的作用。 

3)厭氧(還原)環(huán)境的形成與保持

硫乙醇酸鈉或硫乙醇酸: 在培養基中的主要作用有兩方面,一是L-胱氨酸、葡萄糖有降低氧化還原電位的作用,使深部氧化還原電位較低,因而維持培養基下層的厭氧條件,有利于厭氧菌的生長(cháng)。二是具有鈍化砷和汞類(lèi)藥物及防腐劑的抑菌作用。當汞鹽等物質(zhì)存在時(shí),它與培養基中的SH 基結合,抑制了細菌的生長(cháng)。當培養基中有硫乙醇酸鹽時(shí),培養基內SH 基增多,消除汞鹽等抑菌現象,有利于細菌的生長(cháng)。

瓊脂 : 在培養基中加入少量瓊脂,可減少液面流動(dòng),降低氧的吸收,維持培養基底部的還原電位,有利于厭氧菌的生長(cháng)。但應選用透明度好的瓊脂,以免影響判斷結果。

4)氧化還原指示劑

刃天青為氧化還原指示劑,新鮮制備的培養基,溫度較高,培養基管的上部與氧接觸,刃天青呈藍色,而中下部培養基呈無(wú)氧狀態(tài),刃天青還原為無(wú)色,當培養基放置后,培養基與空氣接觸,有溶氧,刃天青被氧化,變?yōu)榉奂t色。

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使用應注意事項
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配制硫乙醇酸鹽流體培養基時(shí),除按照藥典規定的方法制作外,還需要注意以下問(wèn)題:

1硫乙醇酸鹽流體培養基有0.075 %的瓊脂,在滅菌后,培養基應呈現無(wú)渾濁狀態(tài),如果放置一段時(shí)間,出現輕微渾濁,尤其是放入冰箱后,渾濁現象更加明顯。渾濁程度一方面可能與培養基用的瓊脂質(zhì)量有關(guān),另一方面也可能與滅菌是否徹底有關(guān),具體情況應具體分析。隨著(zhù)目前無(wú)菌檢查對培養基的質(zhì)量要求越來(lái)越高,包括北京三藥在內的國內幾家培養基供應商在這方面的研究有質(zhì)的突破,不僅澄明度高,氧化層也能維持穩定。

2如果存在大體積配制,然后分裝到小的容器中的情況,應注意分裝的均一性。

3培養基在滅菌后至使用過(guò)程中取放應避免搖晃,以免培養基因振動(dòng)而進(jìn)入氧氣,影響培養基的使用,接種操作應動(dòng)作迅速、敏捷。

4在接種前,如果氧化層(粉紅色)的高度超過(guò)培養基深度的1/3,須經(jīng)100℃水浴加熱至粉紅色消失(不超過(guò)20 min),迅速冷卻,只限加熱一次,并防止被污染。

5硫乙醇酸鹽流體培養基含有較多的還原性物質(zhì),在滅菌過(guò)程中,應注意在無(wú)菌保證的前提下,避免過(guò)熱,以防止PH降低到6.9以下的可能。

6供試品加入到硫乙醇酸鹽流體培養基中之后,可能出現瓊脂析出的情況,這個(gè)應根據調查情況具體分析,并采取有效措施。
原文鏈接https://mp.weixin.qq.com/s/LXlRQcZnpuxu_CWLNSvjJg

 

 

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