建立支原體培養基靈敏度檢査(變色單位試驗法)及供試品檢查方法。除藥典推薦培養基外,亦可使用可支持支原體生長(cháng)的其他培養基,但靈敏度必須符合要求。
培養基與菌種對應關(guān)系如下表。

《中國藥典》2015 年版 第四部 3301 支原體檢查法。

(1)試管:螺口旋蓋試管,利于培養時(shí)保持密閉;或者普通玻璃中試管,滅菌時(shí)使用硅膠塞,培養時(shí)換成橡膠塞;或者培養時(shí)使用無(wú)菌液體石蠟液封。
(2)新生牛血清。
(3)滅菌柜、生物安全柜、生化培養箱等。
(1)基礎培養基:按標簽所示配制方法制備,分裝8mL/支,滅菌,待用。
(2)完全培養基:臨用前每支8mL基礎培養基中加入2mL新生牛血清。
注:半流體培養基在使用前應煮沸10?15分鐘,冷卻至56°C左右,然后加入新生牛血清(培養基:血清為 8:2),并可酌情加入適量抑菌劑(青霉素等),充分搖勻?;A培養基,2-8℃可保存3個(gè)月。
將菌種接種于適宜的支原體培養基中,經(jīng)36C±1℃密閉培養至培養基變色, 盲傳兩代。
接種時(shí)建議做梯度稀釋?zhuān)x取剛變色的培養物進(jìn)行下步試驗。(培養時(shí)間太久,支原體容易死亡)
選取變色的新鮮培養物,接種至待檢培養基中,做10倍系列稀釋?zhuān)窝字гw稀釋至 10-7~10-9,接種在支原體肉湯/半流體培養基內;口腔支原體稀釋至10-3~10-5,接種在精氨酸支原體肉湯/半流體培養基內。每個(gè)稀釋度接種3支試管,置36°C±1°C密閉培養7?14天,觀(guān)察培養基變色結果。
以接種后培養基管數的 2/3 以上呈現變色的最高稀釋度為該培養基的靈敏度。
靈敏度應達到:
支原體肉湯/半流體培養基:肺炎支原體應達到10-8;精氨酸支原體肉湯/半流體培養基:口腔支原體應達到 10- 4。

原文鏈接:支原體培養基的靈敏度檢査及供試品檢查(上)。